Método de mantenimiento y uso del tubo de ultrafiltración
Método de mantenimiento y uso del tubo de ultrafiltración
Función del tubo de ultrafiltración:
1) Concentración; 2) Desalinización; 3) Reemplazar el búfer; 4) Tiene el efecto de purificación parcial.
1. El nuevo tubo de ultrafiltración se puede utilizar directamente sin otro tratamiento;
2. El tubo de ultrafiltración no se puede esterilizar a alta temperatura;
3. Tratamiento del tubo de ultrafiltración al cambiar la proteína concentrada
El tubo de ultrafiltración se puede reutilizar. Remojarlo en 0.1M NaOH durante 1-2h, lavarlo con agua y luego lavarlo con la solución relevante (agua esterilizada o PBS) en la centrífuga durante 3 veces, que se puede usar para concentrar nueva proteína;
4. Tratamiento del tubo de ultrafiltración colocado normalmente
Para el tubo de ultrafiltración de uso frecuente, sumérjalo en 0.1M NaOH durante 1-2h, lávelo con agua y sumérjalo en agua esterilizada. Asegúrese de mantener la membrana del filtro húmeda y evitar que crezcan bacterias;
5. Tratamiento del tubo de ultrafiltración colocado durante mucho tiempo
Si el tubo de ultrafiltración no se usa durante mucho tiempo, sumérjalo en 0.1M NaOH durante 1-2h, lávelo con agua y sumérjalo en etanol al 20% para su almacenamiento. Asegúrese de mantener la membrana del filtro húmeda y evitar que crezcan bacterias;
6. Velocidad centrífuga utilizada para el tubo de ultrafiltración
La velocidad centrífuga es generalmente de 4000 rpm (generalmente se recomiendan 3000 g, y el máximo no puede exceder los 4000 g). Después de la centrifugación durante 5-8 minutos, la muestra de 4 ml se puede concentrar a menos de 1 ml a docenas de microlitros; Si la velocidad es demasiado alta, la proteína objetivo se caerá, lo que resultará en la pérdida de proteína objetivo; Baja velocidad, consumo de tiempo y baja eficiencia de trabajo;
7. Precauciones cuando el cabezal de la pistola se extiende hacia el tubo de ultrafiltración
Al agregar solución de proteína o tampón al tubo de ultrafiltración, se puede usar la cabeza azul de la pistola; Sin embargo, cuando la proteína objetivo concentrada se absorbe desde la parte inferior del tubo de ultrafiltración, se debe usar la cabeza amarilla de la pistola; Cuando el cabezal de la pistola se inserta en el tubo de ultrafiltración, se debe evitar que toque la membrana del filtro para evitar perforar la membrana del filtro;
8. Reducir la pérdida de adsorción de proteínas del tubo de ultrafiltración
La membrana del tubo de ultrafiltración puede adsorber proteína, lo que reducirá la proteína objetivo en aproximadamente un 30%; Para reducir la pérdida de proteínas, después de absorber la solución de proteína objetivo, purgue el fondo del tubo de ultrafiltración con tampón de proteína para lavar la mayor parte de la proteína adsorbida por la membrana del filtro y reducir la pérdida de proteína objetivo; Si la proteína purificada está concentrada, preste atención a que el volumen concentrado no debe ser demasiado pequeño; En general, no importa cuán centrifugada esté, alrededor de 200 μ solución de proteína L se retendrán en la parte inferior;
9. Cómo definir la falla del tubo de ultrafiltración
Bajo uso normal, cuando la membrana del filtro no está perforada, la solución de proteína concentrada no contiene proteína o la cantidad es muy baja (incluida la proteína objetivo), mientras que la primera solución filtrada contiene proteína objetivo, indica que la membrana del filtro no es válida y debe reemplazarse con un nuevo tubo de ultrafiltración.
