CM Cromatografía de membrana de intercambio de iones débiles-

Introducción del producto SP cromatografía de membrana de intercambio catiónico fuerte 

 

2. Ventajas del producto

Rápido y eficiente Se puede lograr una alta capacidad de unión a velocidades de flujo hasta 40 veces más rápidas que la cromatografía de resina tradicional. En comparación con la cromatografía convencional basada en resina-, el tiempo de proceso mediante cromatografía de membrana se puede reducir entre 30 y 40 veces. El caudal operativo típico es de alrededor de 10 MV/min.

2.2 Alta eficiencia de unión La cromatografía de membrana exhibe una alta capacidad de unión y altos caudales con una baja caída de presión, lo que permite capturar biomoléculas cargadas en un solo paso a través del módulo.

2.3 Escalable y flexible La gama completa de productos de cromatografía de membrana puede satisfacer las diversas necesidades de purificación de biomoléculas, cubriendo aplicaciones desde el desarrollo de procesos hasta la producción a gran-escala. El diseño de la cápsula permite una operación de un solo-uso o se puede limpiar y reutilizar después de los procedimientos de limpieza adecuados.

2.4 Productividad mejorada El diseño compacto minimiza el espacio que ocupan las instalaciones. Al eliminar operaciones como el empaquetado de la columna, la limpieza, la validación de la limpieza y el almacenamiento de la columna, el procesamiento puede comenzar después de un simple equilibrio con relativamente menos tampón. Dado que no es necesario empaquetar, limpiar o almacenar la columna, los costos de mano de obra se pueden reducir en más del 50%.

 

 

3 parámetros técnicos

3.1 Materiales estructurales

	báscula de laboratorio	pequeña escala	escala piloto	escala de producción
volumen de membrana	0,2 ml	5ml	140ml	5L
Estructura de soporte de membrana	polipropileno
carcasa de membrana	polipropileno
anillo o	Silicona

3.2 Características operativas

	báscula de laboratorio	pequeña escala	escala piloto	escala de producción
volumen de membrana	0,2 ml	5ml	400ml	5L
Caudal recomendado	1-6ml/minuto	25-150ml/minuto	2-12L/minuto	25-150L/minuto
Temperatura máxima de funcionamiento	35 grados
Presión máxima de funcionamiento	3bar(25 grados)
Diferencial de presión máxima	3bar(25 grados)
Condiciones de almacenamiento	20% etanolacolassolución

La comparación muestra que la vida útil de la cromatografía de membrana SP es comparable a la de SP Sepharose 6FF.

Figura 1. Cambios en la capacidad de unión de la cromatografía de membrana SP después de múltiples usos probados con lisozima

Además, evaluamos la cromatografía de membrana para determinar su eficacia en la eliminación de proteínas y ácidos nucleicos de la célula huésped. Los resultados son los siguientes:

	ADN				profesional sanitario
	Recuperación de IgG	Contenido (pg/mg de IgG) por RT PCR		Factor de eliminación	Contenido(ng/mg de IgG)por Elisa		Factor de eliminación
Correr	%	Antes de la membrana Q	Después de la membrana Q	Registro	Antes de la membrana Q	Después de la membrana Q	Registro
1	96.4	423	3.6	2.07	7	4.3	0.21
2	97.4	438	4.3	2.01	7	4.7	0.17
3	94.1	513	5.8	1.95	6	2.3	0.42
4	96.2	32	0.8	1.60	6	3.2	0.27
5	96.3	45	1.9	1.37	8	3.4	0.37
6	96.7	158	2.4	1.82	8	3.5	0.36
7	96.4	267	2.6	2.01	9	6	0.18
8	96.8	298	3.6	1.92	9	7	0.11
9	97.9	746	9.8	1.88	4	1.5	0.43
10	96.2	39	3.2	1.09	4	1.4	0.46

Tabla 1. Tasas de eliminación de proteínas de la célula huésped y del ADN en material de IgG expresado en CHO-mediante cromatografía de membrana SP

Una serie de experimentos demostraron que la cromatografía de membrana SP puede eliminar eficazmente los contaminantes manteniendo una alta tasa de recuperación de la IgG objetivo.

Al comparar la cromatografía de membrana Gudiling SP con marcas importadas, los datos de capacidad de unión son los siguientes:

Vinculantecapacidad (mg/mL)	Sartorio	FÉRETRO	guiando
lisozima	25	32	29
tripsina	22	27	25

Tabla 2. Rendimiento de la capacidad de unión de diferentes proteínas en nuestro producto y en las marcas de la competencia

La evaluación general muestra que nuestra capacidad vinculante es comparable a la de los productos importados.

Figura 2. Prueba de capacidad de unión del módulo de cromatografía de membrana SP utilizando lisozima como estándar

En comparación con la capacidad de unión dinámica y los productos importados, se confirmó que la mayoría de las proteínas diana pueden capturarse cuando la lisozima se eluye en NaCl 190 mM.

A través de diferentes condiciones de elución, encontramos que los perfiles de elución de la cromatografía de membrana son similares a los del gel de agarosa, pero la pureza de las proteínas varía significativamente en diferentes concentraciones de sal. En la investigación y el desarrollo y la producción reales, es necesario determinar cuantitativamente las condiciones de elución óptimas para obtener proteínas objetivo de alta-pureza.

 

4 casos de aplicación típicos

Eliminación de ADN, virus y proteínas de la célula huésped.

Captura de plásmidos, virus, proteínas y purificación de oligonucleótidos.

Eliminación de pigmentos del caldo de fermentación de levadura y captura de proteínas de alta-capacidad

 

5 Procedimiento de uso

5.1 Preparación y montaje de equipos:

5.1.1: Instale el módulo de cromatografía de membrana en un sistema de cromatografía ÄKTA siguiendo procedimientos similares a las columnas de resina, asegurándose de que la dirección del flujo se alinee con las flechas del módulo y la orientación de la entrada. Conecte el módulo mediante cierres Luer o accesorios estilo abrazadera-para una integración segura en el sistema.

5.1.2 Establezca el caudal de alimentación en5 a 10 megavoltios/miny desgasifique el módulo utilizando un tampón de equilibrio, asegurándose de que el efluente esté libre de burbujas de aire. Una vez desgasificado, conecte la salida del permeado al sistema de cromatografía.

5.2: Tratamiento previo-al uso:

5.2.1:

Establezca el caudal de alimentación en5 a 10 megavoltios/miny realizar un tratamiento previo-conNaOH 0,5 M durante más de 5 MV, asegurando que la membrana alcance el equilibrio total.

5.2.2: Con el mismo caudal, realice un tratamiento previo-con1 M NaCl para más de 5 MVpara asegurar que la membrana alcance el equilibrio total.

5.3 Proceso de cromatografía

5.3.1 Establezca el caudal de alimentación en 5–10 MV/min y equilibre la membrana con tampón de equilibrio durante más de 5 MV, hasta que la membrana alcance el equilibrio total.

5.3.2 Después de la pre-filtración de 0,22 μm, cargue la muestra en la membrana hasta que se complete la carga de la muestra o se alcance la capacidad de unión cromatográfica.

5.3.3 Lavar con tampón de equilibrio durante más de 10 MV hasta que la señal UV vuelva a la línea base.

5.3.4 Aplicar elución en gradiente o elución por pasos según el diseño del proceso y recoger las fracciones según sea necesario.

5.4 Tratamiento CIP post-uso: dispositivo de cromatografía de membrana CIP (limpieza in situ)

5.4.1 Establezca el caudal de alimentación en 5–10 MV/min y realice la limpieza con NaOH 1 M durante más de 10 MV, hasta que la señal UV disminuya por debajo de la línea base.

5.4.2 Después de circular durante 30 minutos, cambie al lavado con agua hasta que el pH alcance 7–8, luego continúe limpiando con etanol al 20% hasta que la conductividad se vuelva casi constante.

5.5 Almacenamiento de cromatografía de membrana

Después de su uso y finalización de CIP, el módulo de membrana se puede retirar y almacenar sumergiéndolo en etanol al 20 % o se puede almacenar en línea-a temperatura ambiente en una solución que contenga etanol al 20 %. La solución de etanol al 20% debe inspeccionarse y reemplazarse periódicamente.

 

6. Información de pedido

Filtro de cápsula de cromatografía de membrana de intercambio aniónico fuerte Q

	báscula de laboratorio	pequeña escala	escala piloto	escala de producción
Modelo de producto	IEXQ0002ES	IEXQ0050ES	IEXQ0400ES	IEXQ5000ES
Volumen de membrana	0,2 ml	5ml	400ml	5L

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