Proceso de purificación posterior para la vacuna trivalente felina: ultrafiltración

La rinotraqueítis viral felina, la enfermedad del calicivirus felino y la panleucopenia felina (moquillo felino) son las tres principales enfermedades infecciosas que amenazan la salud de los gatos domésticos en China. La rinotraqueítis viral felina es causada por un herpesvirus y es muy contagiosa. La tasa de morbilidad en gatitos puede alcanzar el 100%, con una tasa de mortalidad del 20% al 50%. La infección por calicivirus felino se caracteriza principalmente por úlceras orales y síntomas respiratorios. Aunque su tasa de mortalidad es relativamente baja, puede provocar fácilmente inflamación crónica y lesiones articulares. La panleucopenia felina se caracteriza por gastroenteritis aguda y una fuerte disminución del recuento de glóbulos blancos; la tasa de mortalidad en gatitos supera el 50%. Por tanto, el desarrollo de una vacuna trivalente inactivada puede proporcionar una mejor protección a las poblaciones de gatos.

 

El virus de la rinotraqueítis viral felina, también conocido como herpesvirus felino tipo 1 (FHV-1), pertenece a la subfamilia Alphaherpesvirinae de la familia Herpesviridae y presenta las características morfológicas típicas de los herpesvirus. El genoma FHV-1 es ADN lineal bicatenario, de aproximadamente 134 kb de longitud, y los viriones tienen aproximadamente 150 a 160 nm de diámetro.

 

El calicivirus felino (FCV) pertenece al género Vesivirus de la familia Caliciviridae. Es un patógeno importante de los félidos y causa principalmente enfermedades del tracto respiratorio superior, úlceras orales e infecciones sistémicas. El genoma del FCV es un ARN monocatenario de sentido positivo, de aproximadamente 7,5 a 7,7 kb de longitud, y los viriones tienen aproximadamente 35 a 40 nm de diámetro.

 

El virus de la panleucopenia felina (FPV) pertenece al género Protoparvovirus de la familia Parvoviridae y tiene las características estructurales típicas de los parvovirus. Su genoma es ADN lineal monocatenario, de aproximadamente 5,1 kb de longitud. Las partículas virales tienen una estructura icosaédrica y miden aproximadamente entre 20 y 24 nm de diámetro.

 

Los siguientes son ejemplos de aplicaciones de las fibras huecas de ultrafiltración de Jiuling Technology en la producción de vacunas trivalentes felinas.

Virus de la rinotraqueítis viral felina (FHV-1)

Utilizamos una fibra hueca de 260 cm² con un MWCO de 300 kDa (HES030010030) para concentrar y diafiltrar 300 ml de la cosecha clarificada del virus de la rinotraqueitis viral felina. A lo largo del proceso de ultrafiltración, evaluamos la recuperación de virus, la eliminación total de proteínas, la disminución del flujo de membrana y la recuperación del flujo de agua.

Muestra	Volumen (ml)	log₁₀ (TCID₅₀/mL)	Recuperación de virus (%)	Concentración de proteína total (ug/mL)	Cantidad total de proteína (ug)	Eliminación total de proteínas (%)
Alimentar	300	7.81	95.47	1604.8	481440	97
Concentrarse	30	8.72		348.4	10452
Enjuague retenido	50	7.74		79.1	3955

A una velocidad de cizallamiento de 2000 s⁻¹, se concentraron 300 ml de alimentación y se diafiltraron a 30 ml, lo que representa una concentración de 10 veces. Se realizó una diafiltración de 20 veces (dos adiciones de tampón), seguida de un enjuague con 50 ml adicionales de líquido. La recuperación del virus fue del 95,47% y la eliminación total de proteínas fue del 97%. Para la producción a escala industrial, el número de enjuagues del retenido se debe aumentar tanto como sea posible en función del volumen muerto del tubo. En general, tres enjuagues son suficientes para una recuperación completa.

 

 

El período de 0 a 25 min fue el paso de concentración y el período de 25 a 70 min fue el paso de diafiltración. Durante todo el proceso de ultrafiltración, la TMP fue inferior o igual a 3 psi, manteniéndose constante la velocidad de alimentación. El flujo de proceso promedio fue de 28,7 LMH.

	TMP (barra)	LMH	Recuperación del flujo de agua (%)
Antes de usar	1.0	300	96.7
Después de la limpieza	1.0	290

Medimos el flujo de agua de la fibra hueca antes y después de su uso. Con la misma velocidad de alimentación, presión de alimentación y presión de retenido, la fibra hueca logró una recuperación del flujo de agua del 96,7 %.

 

Calicivirus felino (FCV)

Utilizamos una fibra hueca de 260 cm² con un MWCO de 100 kDa (HES010010030) para concentrar y diafiltrar 300 ml de cosecha clarificada de calicivirus felino. A lo largo del proceso de ultrafiltración, evaluamos la recuperación de virus, la eliminación total de proteínas, la disminución del flujo de membrana y la recuperación del flujo de agua.

Muestra	Volumen (ml)	log₁₀ (TCID₅₀/mL)	Recuperación de virus (%)	Concentración de proteína total (ug/mL)	Cantidad total de proteína (ug)	Eliminación total de proteínas (%)
Alimentar	300	8.9	95.6	2030.2	609060	94.8
Concentrarse	37.5	9.71		506.8	19005
Enjuague retenido	50	8.85		253.3	12665

A una velocidad de cizallamiento de 2.000 s⁻¹, se concentraron 300 ml de alimentación y se diafiltró a 37,5 ml, lo que representa una concentración de 8 veces. Se realizó una diafiltración de 20 veces (dos adiciones de tampón), seguida de un enjuague con 50 ml adicionales de líquido. La recuperación del virus fue del 95,6% y la eliminación total de proteínas fue del 94,8%. Para la producción a escala industrial, el número de enjuagues del retenido se debe aumentar tanto como sea posible en función del volumen muerto del tubo. En general, tres enjuagues son suficientes para una recuperación completa.

 

 

El período de 0 a 35 min fue el paso de concentración y el período de 35 a 125 min fue el paso de diafiltración. Durante todo el proceso de ultrafiltración, la TMP fue inferior o igual a 3 psi, manteniéndose constante la velocidad de alimentación. El flujo de proceso promedio fue de 18,7 LMH.

	TMP (barra)	LMH	Recuperación del flujo de agua (%)
Antes de usar	1.0	200	95
Después de la limpieza	1.0	190

Medimos el flujo de agua de la fibra hueca antes y después de su uso. Con la misma velocidad de alimentación, presión de alimentación y presión de retenido, la fibra hueca logró una recuperación del flujo de agua del 95%.

 

Virus de la panleucopenia felina (FPV)

Utilizamos una fibra hueca de 260 cm² con un MWCO de 100 kDa (HES010010030) para concentrar y diafiltrar 300 ml de cosecha clarificada del virus de la panleucopenia felina. A lo largo del proceso de ultrafiltración, evaluamos la recuperación de virus, la eliminación total de proteínas, la disminución del flujo de membrana y la recuperación del flujo de agua.

Muestra	Volumen (ml)	log₁₀ (TCID₅₀/mL)	Recuperación de virus (%)	Concentración de proteína total (ug/mL)	Cantidad total de proteína (ug)	Eliminación total de proteínas (%)
Alimentar	300	6.35	94.9	2127	638100	95.8
Concentrarse	37.5	7.17		428.8	16080
Enjuague retenido	50	6.22		210	10500

A una velocidad de cizallamiento de 2.000 s⁻¹, se concentraron 300 ml de alimentación y se diafiltró a 37,5 ml, lo que representa una concentración de 8 veces. Se realizó una diafiltración de 20 veces (dos adiciones de tampón), seguida de un enjuague con 50 ml adicionales de líquido. La recuperación del virus fue del 94,9% y la eliminación total de proteínas fue del 95,8%. Para la producción a escala industrial, el número de enjuagues del retenido se debe aumentar tanto como sea posible en función del volumen muerto del tubo. En general, tres enjuagues son suficientes para una recuperación completa.

 

 

El período de 0 a 30 min fue el paso de concentración y el período de 30 a 110 min fue el paso de diafiltración. Durante todo el proceso de ultrafiltración, la TMP fue inferior o igual a 3 psi, manteniéndose constante la velocidad de alimentación. El flujo de proceso promedio fue de 21,2 LMH.

	TMP (barra)	LMH	Recuperación del flujo de agua (%)
Antes de usar	1.0	190	96.3
Después de la limpieza	1.0	183

Medimos el flujo de agua de la fibra hueca antes y después de su uso. Con la misma velocidad de alimentación, presión de alimentación y presión de retenido, la fibra hueca logró una recuperación del flujo de agua del 96,3%.

Los resultados muestran que las fibras huecas de 300/100 kDa de Jiuling Technology pueden funcionar de manera estable y son adecuadas para esta aplicación. Las tasas de recuperación de virus y eliminación de proteínas logradas con las fibras huecas de 300/100 kDa varían según el material de alimentación. En general, la recuperación del virus puede alcanzar aproximadamente el 95%, mientras que la eliminación de proteínas suele ser del 95% al ​​97%.

Jiuling Technology agradece consultas sobre unidades de prueba y evaluaciones relacionadas.

 

Acerca de Jiuling

Jiuling Technology se especializa en el desarrollo y fabricación de productos para aplicaciones biofarmacéuticas, cultivo celular, purificación y separación. Sus productos se utilizan en procesos de filtración, pruebas, clarificación, purificación y concentración en productos biofarmacéuticos, diagnósticos y fluidos industriales. La cartera de productos incluye dispositivos centrífugos de ultrafiltración, casetes de membrana de ultrafiltración/microfiltración, filtros de eliminación de virus, filtros de grado esterilizante, sistemas de filtración de flujo tangencial, módulos de filtrado profundo y fibras huecas, que sirven para aplicaciones como la fabricación biofarmacéutica y el cultivo celular. Nuestras membranas y filtros de membrana se utilizan ampliamente para concentración, extracción y separación en prefiltración, microfiltración, ultrafiltración y nanofiltración. Operamos múltiples líneas de productos, que van desde filtración de laboratorio de un solo uso a pequeña escala hasta sistemas de filtración a escala de producción, pruebas de esterilidad, fermentación y cultivo celular, satisfaciendo una amplia gama de necesidades de desarrollo y fabricación de procesos. Jiuling Technology espera trabajar con usted.