Proceso de purificación posterior de la vacuna contra la diarrea porcina
La diarrea es una de las tres principales enfermedades que han causado grandes pérdidas económicas a la industria porcina en China. Hay muchos factores que causan la diarrea en los cerdos y los factores virales son los más graves. Los cerdos de todas las edades pueden infectarse, especialmente los lechones lactantes, y la tasa de mortalidad después de la infección puede alcanzar más del 50%. El virus de la diarrea epidémica porcina (PEDV) y el virus de la gastroenteritis transmisible porcina (TGEV) están muy extendidos en el mundo y los dos virus pueden infectarse solos o en combinación. Actualmente, no existen fármacos específicos para tratar PEDV y TGEV, y la prevención y control de la diarrea porcina son principalmente vacunas comerciales.
Las vacunas tradicionales contra la diarrea epidémica porcina incluyen principalmente vacuna inactivada de virus completo y vacuna viva atenuada. Clínicamente, se utilizan comúnmente la vacuna inactivada en tándem o la vacuna atenuada en tándem de PEDV y TGEV, y la vacuna triple inactivada o atenuada de PEDV, TGEV y rotavirus porcino (RV), principalmente la vacuna en tándem de PEDV y TGEV.
En la actualidad, existen muchas vacunas contra la diarrea epidémica porcina en China.
El proceso de producción de vacunas inactivadas y atenuadas es similar e incluye principalmente cinco pasos: cultivo de patógenos, inactivación o atenuación de patógenos, extracción y purificación de patógenos, preparación y envasado de vacunas y control de calidad de las vacunas. Este artículo presenta principalmente el procedimiento de purificación de patógenos.
Clarificación
El propósito de la clarificación es asegurar la eliminación de restos celulares y otros agregados de partículas grandes. En la producción de cultivos celulares de una variedad de venenos, además de contener una gran cantidad de partículas de virus, hay muchos restos de tejido celular y productos metabólicos y otras impurezas, lo que hace que el veneno esté turbio o semi-turbio, el directo El uso de esta operación de concentración de veneno pronto bloqueará la membrana de ultrafiltración y no podrá completar la concentración del veneno, lo que provocará que la membrana de ultrafiltración se deseche. Por lo tanto, antes de concentrar el veneno, primero se debe clarificar, lo que generalmente se hace mediante centrifugación a baja velocidad y filtración con membrana. Cabe señalar que cuando se utiliza la tecnología de separación por membrana, debido a que el material de la membrana a menudo tiene electronegatividad o grupos hidrofóbicos, es necesario investigar si el material de la membrana tiene adsorción a las partículas del virus.
Un paso de clarificación eficiente requiere una combinación de alta capacidad de eliminación de partículas sólidas y alto rendimiento del producto, fácil amplificación y protección de las unidades operativas posteriores. En la actualidad, el filtro profundo se utiliza para la operación de clarificación.
Sin embargo, cuando la escala de cultivo es demasiado grande, se requerirá una gran cantidad de membranas de filtración profunda, lo que dará como resultado un aumento sustancial en el costo de los consumibles. Al mismo tiempo, la alta densidad del cultivo celular reducirá la carga de la membrana del filtro profundo, lo que resultará en mayores costos y una dilución excesiva del producto.
El método de microfiltración utiliza principalmente un dispositivo de filtración de flujo tangencial y los componentes de la membrana son carcasa de membrana plana y fibra hueca. La filtración de flujo tangencial (TFF) está impulsada por la diferencia de presión transmembrana. Las sustancias e impurezas más pequeñas que el tamaño de los poros de la membrana pasan a través de la membrana, mientras que las impurezas, como las células con partículas más grandes, quedan atrapadas. El tamaño de poro de la membrana utilizada para la microfiltración es {{0}}.45/0,22 μm. La microfiltración de flujo tangencial de fibra hueca puede procesar directamente líquidos con alto contenido de sólidos, como un medio de cultivo celular de alta densidad, puede eliminar los pasos de centrifugación y prefiltración con menos pasos y una operación simple, la membrana se puede usar repetidamente mediante limpieza, lo que reduce la inversión y el funcionamiento del equipo. costes, en línea con los requisitos de la producción automatizada modular.
Concentración y purificación.
Después de una aclaración preliminar, el medio de cultivo del virus todavía contiene una gran cantidad de impurezas, incluidas partículas defectuosas, cubierta viral, citotoxina, medio, suero y fragmentos de células, etc. Si estas impurezas se inyectan en animales, no solo afectarán la eficacia de la vacuna, sino que también provocan una fuerte respuesta inmune del huésped e incluso provocan la muerte de los animales vacunados. Por lo tanto, se necesitan concentración y purificación para eliminar impurezas como heteroproteínas y fragmentos celulares, mejorar e inducir respuestas inmunes efectivas, reducir la cantidad de vacuna utilizada y reducir las reacciones adversas.
El principio de purificación del virus: mantener la actividad biológica y la infectividad del virus como premisa, eliminar las impurezas del virus y extraer la alta pureza del virus.
En la actualidad, los principales métodos de concentración y purificación utilizados en la producción a gran escala son la ultrafiltración.
El método de ultrafiltración, utiliza principalmente un dispositivo de ultrafiltración de flujo tangencial, un sistema de filtración de fibra hueca y otros equipos de filtración. En circunstancias normales, la aplicación del método de ultrafiltración puede hacer que el virus se concentre más de 100 veces, con una tasa de eliminación de heteroproteína de hasta el 99%. Entre ellos, la tecnología de filtración por membrana de fibra hueca tiene las ventajas de una fuerza de corte suave y baja, fácil conexión, operación flexible, larga vida útil y bajo costo, y fácil amplificación, por lo que se recomienda elegir fibra hueca para la concentración y purificación de virus.
Cuando se utiliza el método de ultrafiltración para la concentración y purificación, es muy importante seleccionar el tamaño de poro de la membrana adecuado, que determina directamente la eficiencia y la calidad de la concentración. Por un lado, es necesario seleccionar la apertura de la membrana para atrapar eficazmente las moléculas objetivo para garantizar el rendimiento y, por otro lado, se deben considerar plenamente el efecto de eliminación y la velocidad de procesamiento de las heteroproteínas. Por lo tanto, el mejor principio es seleccionar la membrana con el tamaño de poro más grande que pueda atrapar la molécula objetivo e intentar seleccionar la membrana de filtro con una distribución uniforme del tamaño de poro.
El virus de la diarrea epidémica porcina (PEDV) y el virus de la gastroenteritis transmisible (TGEV) son ambos coronavirus, que son esferas polimórficas, con púas invertidas en forma de púas, con un diámetro de entre 60 y 190 nm. La enfermedad por rotavirus es una enfermedad zoonótica en la que el rotavirus (RV) tiene una apariencia de rueda y mide aproximadamente 70 nm de diámetro. Estos tres virus generalmente pueden interceptarse utilizando membranas de ultrafiltración de apertura 100-750kd.
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