Un proceso eficiente y económico para la clarificación y ultrafiltración de levaduras que expresan proteínas recombinantes
La expresión de genes exógenos en levaduras no solo puede producir proteínas y péptidos recombinantes, anticuerpos y vacunas, citoquinas, factores de crecimiento, hormonas y otras sustancias bioactivas, sino que también puede usarse para producir enzimas industriales, alimentos funcionales y materiales biológicos, lo que tiene amplias perspectivas de aplicación. .
El sistema de expresión de levadura incluye dos sistemas de expresión comúnmente utilizados, es decir, el sistema de expresión de Saccharomyces cerevisiae y el sistema de expresión de levadura metanotrófica. El sistema de expresión de levadura con metanol es el sistema de expresión de levadura más utilizado en la actualidad, y Pichia es el más utilizado y puede utilizar metanol como carbono y energía. Además, están la levadura de Hansen, Sphaeroides, etc.
No importa qué tipo de sistema de expresión de levadura, sus procesos de separación y purificación posteriores son similares, y el flujo del proceso específico toma como ejemplo la expresión de levadura de proteínas recombinantes y fármacos polipeptídicos.
Los casetes de membrana de microfiltración Guidling adoptan un canal de flujo abierto y un modo de filtración de flujo tangencial, que pueden procesar eficazmente líquidos de alimentación complejos, como el líquido de fermentación de levadura y el líquido de craqueo de E. coli a alta velocidad, y pueden garantizar una amplificación lineal desde una prueba pequeña hasta una escala de producción. El diseño modular compacto, la conexión simple de la tubería, la independencia y la legibilidad del sistema pueden proteger a los operadores y prevenir la contaminación biológica. Y sin verificación de mantenimiento y limpieza. Por lo tanto, es muy adecuado para la etapa de clarificación del procesamiento posterior inicial.
El objetivo principal del proceso UF/DF es eliminar impurezas y desplazar los amortiguadores. El casete de membrana de ultrafiltración Guidling tiene una buena homogeneidad del tamaño de los poros de la membrana y una fuerte hidrofilicidad, lo que puede darle a la membrana un mayor flujo y una menor adsorción de proteínas, y un diseño de canal de flujo optimizado, con una menor caída de presión, una fácil transferencia de material y un tiempo de filtración significativamente más corto. Además, la serie de productos es completa y flexible para satisfacer las necesidades de diversas aplicaciones de diferentes escalas. Por lo tanto, es muy adecuado para el paso UF/DF del procesamiento posterior.
El siguiente es el caso de aplicación de la membrana Guidling.caseteen la expresión de proteínas recombinantes en levaduras.
Clarificación por microfiltración
Usamos {{0}}.11 metros cuadrados de casete de membrana de poro de 0,22 μm para clarificar 1,5 l de líquido de fermentación de levadura (peso molecular de la proteína objetivo 42-55 KD) mediante microfiltración. En todo el proceso de microfiltración, se investigó la tasa de recuperación de la proteína objetivo, el cambio de turbidez y el agotamiento del flujo de membrana.
0-17min es el proceso de concentración, 17-32min es el proceso de lavado y filtración. Durante todo el proceso de microfiltración, la TMP aumentó gradualmente, la velocidad de entrada del líquido se mantuvo sin cambios y el flujo de material promedio fue de 45 LMH.
La turbidez del líquido era de 600 NTU antes de la microfiltración y de 8 NTU después de la microfiltración, y la turbidez cambió obviamente.
Los resultados mostraron que el rendimiento de la proteína objetivo fue > 90%. El casete de membrana de 0,22 μm de Guidling Technology es estable y adecuado para este escenario de aplicación.
Concentración de ultrafiltración
La concentración de ultrafiltración de 1,5 l de líquido clarificado (peso molecular de la proteína objetivo 42-55kd) se realizó utilizando 0.11 metros cuadrados de casete de membrana de 10 kd. En todo el proceso de ultrafiltración, se investigaron la tasa de recuperación de la proteína objetivo, el agotamiento del flujo de membrana y la tasa de recuperación del flujo de agua.
Antes y después de su uso, la tasa de recuperación de la membrana puede alcanzar el 90%.
0-15min es el proceso de concentración, 15-18min es el proceso de intercambio de líquido. Durante todo el proceso de ultrafiltración, la TMP aumentó gradualmente, la velocidad de entrada del líquido se mantuvo sin cambios y el flujo de material promedio fue de 50 LMH.
Los resultados mostraron que la proteína objetivo quedó completamente atrapada. Los casetes de membrana Guidling Technology de 10 kd pueden funcionar de manera estable y son adecuados para este escenario de aplicación.
La mayoría de las proteínas recombinantes expresadas por la levadura no se expresaron altamente. La turbidez del líquido filtrado se redujo obviamente y la tasa de recuperación de proteínas fue mayor. Debido a que el tiempo cromatográfico posterior es demasiado largo, causará efectos adversos en la proteína; para acortar el tiempo de muestreo cromatográfico, se puede agregar un paso de concentración de ultrafiltración y la proteína objetivo se puede concentrar rápidamente después de la muestra, lo que puede lograr el propósito de ahorrar tiempo, reducir el volumen de llenado y así reducir el costo de producción.
Los casetes de membrana de microfiltración de Guidling Technology generalmente pueden reducir la turbidez del líquido de alimentación a menos de 20 NTU, satisfaciendo plenamente las necesidades de ultrafiltración y cromatografía posteriores. La tasa de recuperación de ultrafiltración de los casetes de membrana de ultrafiltración variará debido a los diferentes materiales; la tasa de recuperación general puede alcanzar el 90-95 %.
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Acerca de Guidling
Guidling Technology es una empresa nacional de alta tecnología que se centra en productos biofarmacéuticos, cultivo celular, purificación y concentración de biomedicina, diagnóstico y fluidos industriales. Hemos desarrollado con éxito dispositivos de filtrado centrífugo, casetes de ultrafiltración y microfiltración, filtros de virus, sistemas TFF, filtros de profundidad, fibras huecas, etc. que satisfacen completamente los escenarios de aplicación de productos biofarmacéuticos, cultivos celulares, etc. Nuestras membranas y filtros de membrana se utilizan ampliamente en concentración, extracción y separación de prefiltración, microfiltración, ultrafiltración y nanofiltración. Nuestras numerosas líneas de productos, desde filtración de laboratorio pequeña y de un solo uso hasta sistemas de filtración de producción, pruebas de esterilidad, fermentación, cultivo celular y más, satisfacen las necesidades de pruebas y producción. ¡Guidling Technology espera cooperar con usted!